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CircRNA的形成和線性RNA不同，因此對circRNA的過表達不能直接將序列連接到常規(guī)的真核表達載體（如pcDNA3.1）來進行。

已明確的circRNA形成依賴于側(cè)翼序列中的反向互補序列（RCMs，如Alu元件）或與能調(diào)控circRNA生成的蛋白（如QKI）的結(jié)合位點，因此構(gòu)建載體時可以在circRNA序列上下游分別增加一段反向。